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台式色度测定仪测量荧光样品如何校准

时间:2025-07-18 14:39:39   访客:33

台式色度测定仪测量荧光样品时,需通过针对性校准消除荧光效应对色度检测的干扰。荧光样品受激发光照射会发射额外荧光,导致检测光强包含色度本身吸收光与荧光发射光的叠加信号,常规校准方法无法消除这种干扰,需建立 “荧光干扰消除 — 基础校准 — 补偿校准” 的三阶校准体系。

校准前准备需聚焦荧光特性适配。选择与样品激发波长匹配的滤光片组合,通常配备 450-500nm 激发光截止滤光片,避免激发光直接进入检测系统。准备经认证的标准色度溶液(如铂钴标准液),同时准备无荧光干扰的空白溶液(如超纯水)和与样品荧光特性相似的荧光空白液(不含色度物质但含荧光基质)。校准环境需控制光源稳定性,关闭周围强光源,检测仓内壁张贴哑光黑色吸光材料,减少荧光反射干扰。比色皿选用低荧光石英材质,使用前用荧光空白液清洗 3 次,避免残留荧光物质。

荧光干扰消除校准是核心步骤。将荧光空白液注入比色皿,放入检测仓,在仪器操作界面选择 “荧光校正” 模式,设定激发光波长(与样品荧光激发波长一致)和荧光发射波长(样品主要发射波长)。仪器会自动测量荧光空白液的发射光强度,记录荧光基线值并存储为干扰补偿参数。若样品荧光强度随时间衰减,需在每次测量前重新进行荧光空白校准,确保补偿参数时效性。此步骤需重复 3 次,取荧光基线平均值作为最终补偿值,偏差需≤±2%。

基础色度校准需叠加荧光补偿。零点校准使用无荧光空白液(超纯水),启动校准程序后,仪器会自动扣除预设的荧光基线值,使零点读数稳定在 0 铂钴单位(PCU)。跨度校准选用中浓度标准色度溶液(如 50PCU),注入比色皿后等待 5 分钟(确保温度稳定),执行校准程序,仪器将检测值与标准值对比,自动调整光学系统增益,同时叠加荧光补偿算法。校准完成后,需验证校准曲线线性度,检测 20PCU、80PCU 标准液,相对偏差需≤±3%,线性相关系数 R²≥0.999。

荧光补偿校准验证需模拟实际样品。使用已知色度值且含荧光成分的验证样品(如添加荧光剂的 50PCU 标准液),经校准后的仪器检测值与理论值偏差需≤±4%。若偏差超标,需重新优化荧光截止滤光片组合,或增加荧光发射波长的检测通道,通过双通道数据融合(色度吸收光 + 荧光发射光)提升补偿精度。验证过程中需记录荧光强度与色度检测值的对应关系,建立干扰修正模型,用于后续同类样品检测。

校准后参数固化与维护需规范执行。完成所有校准步骤后,在仪器中保存 “荧光样品模式” 参数组,包含滤光片组合、荧光补偿值、校准曲线等,下次测量时直接调用。每次测量前需检查荧光空白液状态,若出现浑浊或荧光强度变化(超过初始值的 5%),需重新配制并校准。每周用标准色度溶液验证校准有效性,偏差超过 ±5% 时需重新执行全流程校准。长期停用后,首次使用需进行完整校准,确保荧光补偿参数与光学系统状态匹配。

该校准方法通过分离荧光干扰信号与色度检测信号,实现荧光样品的精准色度测量。关键在于荧光补偿参数的动态适配,需根据样品荧光特性调整校准频率,在保证操作规范性的同时,兼顾检测效率与数据准确性。校准记录需包含荧光参数、补偿值及验证结果,为后续数据追溯提供依据。



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